因为表达载体中含有抗性基因,能表达抵制抗生素的酶,所以只有含有载体的大肠杆菌才可以在含有抗生素的培养皿上生长,而未被转化的细菌则因受到抗生素的抑制而死掉。
你还参照实验手册做了下面四组对照:
对照一、在含有抗生素的培养皿上面涂布未被转化的(即不含有载体的)大肠杆菌感受态细胞(cells alone)。
对照二、用未被酶切的载体直接转化大肠杆菌感受态细胞,将产物涂布在含有抗生素的培养皿上面(vector alone)。
对照三、用BamHI酶切载体DNA后,不用碱性磷酸酶处理,不需要cDNA,直接加入DNA聚合酶,然后转化、涂板(Omit phosphatase,omit eDNA)。
对照四、除使用碱性磷酸酶外,其它与对照三相同(Omit cDNA)。
你一共做了三次实验,在第一次中所有的平板中都长出很多细菌。在第二次实验中所有的平板中都没有长细菌。在第三次实验中你得到了较好的结果,转化成功,具体克隆数见下表:
请回答下列问题:
实验中同时设置了四个对照:
对照1:将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照2:将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照3:将经切割(但未用碱性磷酸酶处理)并用连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
对照4:将经切割(并用碱性磷酸酶处理过)并用DNA连接酶连接(但没有cDNA片段)的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。
在进行第一次实验时,感受态细胞不是自己制备的,结果在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落(表Q25.2)。在第二次实验中,自己制备感受态细胞,但这一次,所有的平板上都没有菌落生长(表Q25.2)。接着又进行了第三次实验,这次得到了转化子(表Q25.2)。从实验平板上挑出12个菌落,分离了质粒DNA,并用BamH Ⅰ进行切割,其中9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带,另三个克隆中切出一个cDNA片段,实验终于获得成功。
表Q25.2 cDNA克隆的结果
注:TMTC=too many to count,多到无法计数。
A.为双链DNA分子
B.能够作为克隆基因组文库的载体
C.为单链DNA分子
D.能够克隆大于10kb的DNA片段
E.能够作为克隆cDNA文库的载体
A.从cDNA文库中可筛选得到真核基因的表达序列
B.不同器官来源cDNA文库,其中各个克隆所含的DNA的片段是不完全相同的
C.cDNA文库只包含表达蛋白质或多肽基因
D.cDNA文库只包含内含子和调控区的基因
E.cDNA文库中某一克隆的扩增即是特异的cDNA克隆
A.外显子以相同顺序存在于基因组和cDNA中
B. 内含子经常可以被翻译
C. 人体内所有的细胞具有相同的一套基因
D. 人体内所有的细胞表达相同的一套基因
E. 人体内所有的细胞以相同的方式剪接每个基因的mRNA
为了最大限度地提高克隆效率,载体用只有一个切点的限制性内切核酸酶Xho Ⅰ(5'-C↓TCGAG)进行切割,然后在dTTP存在的情况下,同DNA聚合酶一起进行温育。将一种具有平末端的双链cDNA同一段含由两段寡聚核苷酸组成的双链寡聚核苷酸接头连接起来,这两段寡聚核苷酸的序列是:5'-CGAGATTTACC和5'-GGTAAATC,它们的5'端都是磷酸。然后将载体和cDNA混合并连接在一起。采用这种方法用2μg的载体和0.1μg的cDNA,构建了一个有4×107个克隆的cDNA文库。问: